蛋白质磷酸化是真核细胞中最常见、最重要的翻译后修饰（Post-translational Modification, PTM）之一。它广泛参与细胞增殖、凋亡、代谢、应激响应等关键生物学过程，在癌症、自身免疫疾病、神经退行性疾病等重大疾病中扮演着核心角色。然而，磷酸化修饰具有动态性强、丰度低、易受抑制性离子干扰等特点，给其系统性检测与定量带来极大挑战。为深入解析细胞信号通路，亟需一套兼顾灵敏度、准确性与通量的磷酸化蛋白定量策略。TMT标记（Tandem Mass Tag）结合高分辨率质谱分析，正成为当前磷酸化蛋白组学研究的技术主流。

一、什么是TMT标记技术？

TMT是一种异位同位素标记的化学标签，可在蛋白酶解后对肽段N端和赖氨酸侧链进行共价标记。每个TMT标签由报告离子（Reporter Ion）、平衡基团（Balance Group）和反应基团（Reactive Group） 三部分组成。虽然不同标签的质量总和相同，但在质谱二级碎裂（MS/MS）阶段会释放出 不同质量的报告离子，从而实现多样本在同一次质谱分析中的相对定量。

目前，TMT标签最多可支持 16-plex甚至18-plex，极大提高了样本通量，减少了技术重复误差。

二、TMT磷酸化蛋白定量技术的核心流程

为了实现高覆盖度、高灵敏度的磷酸化蛋白定量，通常采用以下优化流程：

1、样本制备与蛋白提取

以细胞、组织或生物液体为起始材料，使用裂解液充分提取总蛋白，去除核酸、多糖等杂质。确保样本间蛋白总量一致是后续定量的关键前提。

2、胰蛋白酶酶解 & TMT标记

蛋白质经还原烷基化后，使用胰蛋白酶消化为肽段。随后对不同实验组分别进行TMT标签标记，并合并所有样本，统一进入下一步富集流程。

3、磷酸化肽段富集（IMAC 或 TiO₂）

磷酸化肽段在肽段总体中比例极低（<5%），需使用专一性富集策略如 金属离子亲和色谱（IMAC） 或 二氧化钛（TiO₂）微柱 选择性富集磷酸肽。

4、高pH反相分级 & LC-MS/MS分析

为提升蛋白覆盖度与磷酸化位点识别数，建议在LC-MS前进行一次高pH反相分级。随后通过高分辨率质谱（如Orbitrap Exploris、Fusion Lumos）进行DDA模式的数据采集。

5、数据分析与功能注释

使用Proteome Discoverer等软件进行数据库搜索、定量分析和磷酸化位点定位。后续可结合GO/KEGG富集、PPI网络构建等生物信息学手段挖掘潜在调控机制。

三、技术优势：为何选择TMT用于磷酸化蛋白定量？

四、百泰派克生物科技：一站式TMT磷酸化蛋白组服务平台

在百泰派克生物科技，我们基于国际先进的 Orbitrap质谱平台，建立了高灵敏度、高重现性的TMT磷酸化蛋白质谱服务流程。我们的服务优势包括：

• 专业的磷酸肽富集方案（IMAC/TiO₂/Ti-IMAC）
• 多达18通道的高通量TMT定量方案，支持大样本队列研究
• 严格的质控体系与生信分析支持，助力科研从数据到发现
• 丰富的项目经验，涵盖肿瘤、免疫、代谢、干细胞等多个研究方向

无论您是初探磷酸化修饰，还是深耕信号通路调控，百泰派克生物科技都可为您定制个性化解决方案，赋能科研新突破。

TMT标记的磷酸化蛋白定量技术，正以前所未有的通量与精度，重塑我们对蛋白信号网络的理解。未来，随着质谱技术与富集策略的不断进化，这一技术将继续在疾病机制解析、新药靶点发现、个体化治疗开发等领域发挥核心作用。若您有相关研究需求，欢迎联系百泰派克生物科技获取免费技术咨询与项目评估！

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百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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